梁兴杰课题组
梁兴杰课题组
分享--牛棒状杆菌防治探讨
l 牛棒状杆菌（Corynebacterium bovis,C. bovis）
牛棒状杆菌是引起奶牛乳房炎的常见细菌之一。近年来，该病原体在啮齿类动物实验研究中有较多报道。许多研究者发现，该菌对无毛鼠和免疫缺陷鼠致病，一旦感染，几乎是终身性携带；但免疫功能正常的大小鼠一般不会（长期）携带。感染C. bovis后，裸鼠典型临床症状为体表出现鳞片状皮屑；SCID鼠则出现脱毛、形成秃块等症状。组织病理学观察均可发现表皮增生和过度角质化、巨噬细胞和中性细胞浸润等现象。动物感染，常伴随出现体重减轻、摄水量增加、异种移植物生长缓慢、对化疗的敏感性增加、新生仔鼠死亡率增加等异常现象，而且往往会对实验结果有较大影响。
一、 可行性预防措施探讨
1. 硬件设施：大小鼠应饲养在SPF级动物设施中，具体硬件指标应符合GB 14925的要求。
2. 仪器设备、实验器材：笼盒、笼架等采取高温（≥80℃）和/或高压灭菌的方式进行消毒，不适合高压的仪器设备、实验器材使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1CLIDOX）或同等效力消毒剂进行表面擦拭。
3. 物料：采用辐照或高压灭菌的饲料、垫料、水，定期进行无菌检测；其余物料进行高压或其他灭菌方式处理，保证灭菌效果。
4. 人员：固定人员（饲养员、实验员）进行同一房间的动物处理，不交叉处理其他房间内动物。若实验人员同时进行不同实验项目，则应保证先操作裸鼠品系，再操作其他品系。
5. 日常清洁消毒：不只局限于动物房的饲养间，其它包括实验间、走廊、更衣室、缓冲间等，都应使用含有效氯400～700 mg/L的消毒液（或1:18:1 CLIDOX）进行地面、墙面、天花板，桌面、房门、笼架、笼具及其他设备外表面等的消毒。
6. 笼盒操作：尽可能减少笼盒操作，若同一房间内放置了多个批次、多种品系的动物，建议先操作新到的裸鼠品系，再操作其他品系。
1) 饲养/实验人员应穿着全套灭菌PPE（隔离衣、口罩、头套、鞋套、手套等），操作前使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1CLIDOX）充分消毒手套，同时建议佩戴双层手套，并密封手套与袖口连接处；
2) 在关闭超净台或生物安全柜紫外灯之前，应确保已照射灭菌20min。开启通风，再次使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1CLIDOX）进行内部喷雾消毒；
3) 从笼架上取下笼盒，使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1CLIDOX）喷雾笼盒外表面，并放置于超净台或生物安全柜中；
4) 在超净台或生物安全柜中操作笼盒时，应确保双手位于风幕内10cm；
5) 将小鼠从脏盒转移至新盒中时，建议使用镊子，而且最好交替使用2把。一把在用时，另一把可浸泡于含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1CLIDOX）中消毒，镊子浸泡消毒的时间应不低于3min。同一笼盒动物可使用同把镊子，但不同笼盒需更换不同镊子。消毒剂应保证当天新鲜配制，以防有机碎屑积累过多而导致消毒效果降低。
6) 操作完一个笼盒，应使用酒精对手套进行喷雾消毒，然后再进行下一笼盒的操作。
每操作完同一个实验项目，同一个动物品系或一面IVC笼架（最多不超过70盒），都应及时更换新手套，以减少交叉感染的可能。
7. 垃圾处理：脏垫料、实验废弃物、动物尸体等应及时封袋，储存于指定位置，无遗洒。每日垃圾应有专人负责收集，收集后该人员不得再接触动物，并用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1CLIDOX）对垃圾箱进行喷雾消毒。
二、 日常观察及病情判断
研究过程中如果用到裸鼠，除了实验本身要求的所做观察项目之外，研究人员还应增加一项裸鼠皮肤皮屑的观察。如果观察到某只裸鼠皮肤表面出现了大量皮屑，应立即引起足够重视：有可能是单纯弥漫性皮炎，也有可能是牛棒状杆菌感染。如果是前者，皮屑症状往往仅表现为个体散发，且同笼动物之间不会互相传染，牛棒状杆菌的检测呈阴性。如果某只动物出现皮屑症状后，同笼动物在后续3-5天内也全部出现相同症状，基本上可以判断为牛棒状杆菌感染。
三、 感染后处理
1. 患病动物处理：观察到上述现象后，建议对患病动物进行应急检测（细菌培养或PCR）。如果的确感染了牛棒状杆菌，一般不建议对患病动物进行治疗。建议立即将同笼动物全部淘汰，密封并进行无害化处理；笼盒（包含盒内物料）进行高压处理后再进行脏垫料倾倒、清洗、消毒处理。若动物极其珍贵或治疗处理不影响实验研究，患病动物可以通过给予抗生素治疗减少临床症状，牛棒状杆菌对四环素、恩诺沙星和氨苄西林敏感。同时，可以使用碘液等对病变皮肤进行局部涂抹，每日1-2次，可改善皮肤病变，但已增生的角质需较长时间恢复（不可使用含氯或含醛成分的药物涂抹皮肤）。由于抗生素治疗仅能抑制临床症状，而不能根除牛棒状杆菌，故对于珍贵动物，需通过胚胎移植或剖腹产等手段进行净化。
2. 动物种群处理：如果种群内检测到有牛棒状杆菌阳性个体存在，建议全群淘汰。
3. 设施净化：受感染的动物全部淘汰后，可通过熏蒸（例如，甲醛、过氧化氢等）方式重新净化房间。房间无菌状况检测合格后，方可引进牛棒状杆菌检验为阴性的动物。同时在后续管理中，建议加强生物防控措施，密切观察动物状况，防止该病再次感染和蔓延。